凝胶过滤层析填料也称分子筛层析、排阻层析。是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质，小分子物质能进入其内部，流下时路程较长，而大分子物质却被排除在外部，下来的路程短，当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时，溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。
凝胶过滤层析填料的应用：
1.脱盐与浓缩
利用眼泪小分子物质可以在凝胶的筛孔中自由扩散，而大分子物质被排阻在其外的原理，选择凝胶将小分子盐有效的除去。比透析方法更加温和，速度快，不引起生物大分子的变性。对盐析样品的后处理非常适用。
2.分离生物样品
某些理化性质相近（溶解度、电荷性），分子量不同或聚合体不等的混合样品，其他方法难以奏效时，凝胶过滤方法便适用。
用加工修饰的凝胶纯化糖链分子、膜蛋白、抗原、抗体、分离重组蛋白，包含体蛋白、肽类、核酸、病毒以及寡核苷酸等。
3.去除热源物质
热源又称内毒素，是含脂肪A、糖类和蛋白，带负电荷的复合大分子。由于是制备药品工艺中难以克服的问题，经常引起临床的安全。可利用凝胶排阻原理，将热源物质从药品中排除。
凝胶过滤层析填料突出优点是层析所用的凝胶属于惰性载体，不带电荷，吸附力弱，操作条件比较温和，可在相当广的温度范围下进行，不需要有机溶剂，并且对分离成分理化性质的保持有独到之处。对于高分子物质有很好的分离效果。
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